本报告中不同泳道中TAQ酶的来源公司:
Lane1: 国外品牌 Lane2: 国内品牌 Lane3: KeyGen I Lane4: KeyGen II
M: DNA Marker, DL2000
本报告中对扩增的长片段:
长片段模板DNA为pET28a-MHC I Heavy Chain ;短片段模板DNA为pET28a-β2microglobulin ;
所用引物浓度为10uM ;dNTP浓度为10mM ;
通用反应体系为:
H2O *
10×Buffer 2.5
MgCl2 *
dNTP 0.7
up-stream primer 0.7
down-stream primer 0.7
plate DNA 1
Taq polymerase *
Total volume 25 uL
注:1)本体系以25 uL反应体积为例,50 uL 反应体积各反应物加倍。
2)* 表示所加量根据不同反应作相应的调整。
1. 不同酶量时四种TAQ酶扩增长片段效率的比较
Fig.1 不同酶量时四种TAQ酶扩增长片段效率的比较
结论: 对长片段:高酶浓度时扩增效率: 酶1 = 酶3 = 酶4 > 酶2 ;
低酶浓度时扩增效率: 酶1 > 酶3 = 酶4 > 酶2 ;
对四种酶,高酶浓度的扩增效率优于低酶浓度.
2. 不同反应体积时四种TAQ酶扩增长片段效率的比较
Fig.2 不同反应体积时四种TAQ酶扩增长片段效率的比较
结论: 对长片段:25ul 和50ul反应体系时扩增效率: 酶4 > 酶3 = 酶1 > 酶2 ;
对四种酶, 25ul反应体系扩增效率优于50ul反应体系.
3. 不同模板拷贝时四种TAQ酶扩增长片段效率的比较
Fig.3 不同模板拷贝时四种TAQ酶扩增长片段效率的比较
结论:对长片段:高模板浓度时扩增效率: 酶4 = 酶3 = 酶1 > 酶2 ;
低模板浓度时扩增效率: 酶4 > 酶3 > 酶1 > 酶2 ;
对四种酶,高模板浓度的扩增效率优于低模板浓度.
4. 不同酶量时四种TAQ酶扩增短片段效率的比较
Fig.4 不同酶量时四种TAQ酶扩增短片段效率的比较
结论:对短片段:高酶浓度时扩增效率: 酶1 = 酶3 > 酶4 = 酶2 ;
低酶浓度时扩增效率: 酶4 > 酶3 = 酶2 = 酶1 ;
对四种酶,高酶浓度的扩增效率优于低酶浓度.
5. 不同反应体积时四种TAQ酶扩增短片段效率的比较
Fig.5 不同反应体积时四种TAQ酶扩增短片段效率的比较
结论:对短片段:25ul 和50ul反应体系时扩增效率: 酶1 = 酶3 = 酶4 > 酶2 ;
对四种酶, 25ul反应体系扩增效率相似于50ul反应体系.
6. 不同模板拷贝时四种TAQ酶扩增短片段效率的比较
Fig.6 不同模板拷贝时四种TAQ酶扩增短片段效率的比较
结论:对短片段:高模板浓度时扩增效率: 酶3 > 酶4 = 酶1 = 酶2 ;
低模板浓度时扩增效率: 酶4 > 酶1 > 酶3 > 酶2 ;
对四种酶,高模板浓度的扩增效率优于低模板浓度.