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BV-2细胞培养小妙招|中乔新舟限时福利:集赞满38个,BV-2细胞半价

作者:上海中乔新舟生物科技有限公司 2024-03-25T00:00 (访问量:13252)

您培养bv-2的时候出现这些情况吗?

生长缓慢?

悬浮细胞多?

细胞容易聚团?

贴壁细胞很瘦小?

静息与激活状态下分别是什么样子?

 

下面将会为大家一一解答这些问题。

 

bv-2细胞背景

BV2小鼠小胶质细胞,是由E·Blasi建立于1990年,BV-2细胞由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。免疫组化结果显示BV2为MAC1、MAC2阳性,而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。且是高度纯化的永生细胞系,同时该细胞系具备了原代培养的小胶质细胞的形态学、表型以及各项功能特点,相较于原代培养的细胞而言,永生化的细胞系培养起来更为容易。因此目前被广泛的运用于科研究当中。

 

bv-2细胞特征

Bv-2是多形态型细胞,半贴壁半悬浮生长,因此它的形态是不规则的,存在圆形和梭形两种形态。圆形的多为悬浮形态,细胞状态良好时边缘光滑、折光度高,贴壁细胞则既有圆形也有梭形,有短触角或凸起伸出。

如下图所示

 

bv-2细胞(货号ZQ0397)

 

Bv-2细胞培养细节

培养条件

MEM(货号:ZQ-300)+10%FBS(货号:ZQ0500)+1%P/S(货号:CSP006)+1%Sodium Pyruvate 100 mM Solution(货号:CSP003

中乔培养过程种添加丙酮酸钠是因为丙酮酸钠作为细胞能量来源,在细胞培养基中起到替代碳源的作用,参与细胞营养代谢,维持细胞的生长速度和状态。

 

丙酮酸钠货号:CSP003)

传代比例:1:3-1:6,每2-3天换液一次

传代步骤

由于bv-2是半悬浮细胞,因此在如图所示密度 80%-90%时,即可进行传代分瓶。

当漂浮的悬浮细胞和圆润细胞比较多时,建议先用吸管轻柔吹打4-6下收集悬浮细胞。当漂浮圆润细胞少时,则弃去培养上清,PBS轻柔洗细胞1-2次。

1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后用手掌心拍打瓶尾后,在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。(T25培养瓶建议添加3ml终止液)。

1:3-1:6轻轻打匀后吸出细胞悬液,在800-1000RPM条件下离心4-5分钟, 弃去上清液,用手指波动离心管弹松细胞沉淀。

1-2ml培养液后进行1:3-1:6分瓶。再添加新鲜培养基进行培养。(t25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。

冻存条件:无血清冻存液(液氮保存)

 

无血清细胞冻存液(货号:CSP04)

 

Bv-2细胞培养问题

1、生长缓慢:

1.bv-2细胞增值速度很快,倍增时间约为25-35h,当发现生长缓慢时排除污染的可能性,比如真菌污染,细菌污染,支原体污染等因素。

2.适当提高一点血清含量,及补充丙酮酸钠。

2、悬浮细胞变多?

1.Bv-2对培养基酸碱度比较敏感。PH偏碱时候,培养基呈紫红色。在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。

2.由于bv-2生长速度快,13传代后,48h后就需要换液,否则细胞密度过大,营养成分减少,容易出现大量细胞漂浮的情况,及时换液即可。

3、细胞容易聚团?

1.BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。当圆形细胞聚成团块处于贴壁细胞上和培养基里时,说明细胞处于快速增值分裂的生长状态,及时传代处理即可。

4、贴壁细胞很瘦小?

1.Bv-2细胞出现瘦小、拉丝、不增值等情况时,可能是细胞存在微生物污染,刺激后自行分化、血清营养价值不高,消化传代过度导致细胞膜损伤等情况导致细胞很瘦小。

2.建议排查污染源,更换血清,分化后的细胞贴壁更牢,极难消化,因此应尽量缩短消化时间,预防细胞分化,重新复苏新种子。

5.静息与激活状态下分别是什么样子?

1.受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚,胞体增大,呈现阿米巴样

2.非激活状态有触角,LPS激活后触角逐渐消失(激活BV2细胞形态有点像小眼睛)

3.静息状态下的细胞是成梭形有伪足的,受到刺激的bv-2突起缩短变厚,胞体增大,呈现阿米巴样。

4.MEM基础培养基(货号:ZQ-300

 

MEM基础培养基(货号:ZQ-300)

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