产品性质

    

        

            
产品名称
            
产品编号
            
规格
            
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价格（元）
        
        

            
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase 热启动型高保真酶
            
10115ES60
            
100U
            
-20℃
            
455
        
        

            
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase 热启动型高保真酶
            
10115ES76
            
5×100U
            
-20℃
            
2048
        
    

产品描述
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase在HieffTM Pfu DNA Polymerase（Cat No: 10113ES60）的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR，扩增产物为平端。HieffTM Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52，是Pfu酶的1/6；且扩增速度可以达到15秒/kb。
本产品中附带的5× HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
产品组分

    

        

            

            
编号
            
            

            
组分
            
            

            
产品编号/规格
            
        
        

            
10115ES60（100U）
            
10115ES76（500U）
        
        

            
10115-A
            
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4)
            
1.25 ml
            
1.25 ml×5
        
        

            
10115-B
            
25 mM MgSO4
            
1 ml
            
1 ml×5
        
        

            
10115-C
            
dNTP Mix(10 mM each)
            
100 μl
            
100 μl×5
        
        

            
10115-D
            
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)
            
100 μl
            
100 μl×5
        
        

            
10115-E
            
5×PCR Enhancer
            
500 μl
            
500 μl×5
        
        

            
10115-F
            
DMSO
            
100 μl
            
100 μl×5
        
        

            
10115-G
            
10×Loading buffer
            
1.25 ml
            
1.25 ml×5
        
    

活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 oC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本?和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

使用方法

1. 反应体系配制：
所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HieffTM HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物，请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。

    

        

            
ddH2O
            

            
to 50 μl
            
        
        

            
5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4)
            
10 μl
        
        

            
25 mM MgSO4a
            
optional
        
        

            
dNTP Mix(10 mM each)b
            
1 μl
        
        

            
DMSOc
            
optional
        
        

            
5×PCR Enhancerd
            
optional
        
        

            
模板DNAe
            
optional
        
        

            
Forward Primer(10 μM)
            

            
2 μl
            
        
        

            
Reverse Primer(10 μM)
            
2 μl
        
        

            
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f
            
1 μl
        
    

【注】：a. 对于大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+，如有需要，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 扩增子GC含量>60%时加入终浓度3%的DMSO有可能会有助于扩增。
d. 推荐仅当扩增子GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。
e. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

    

        

            
模板种类/扩增长度
            
＜1 kb
            
1 kb～10 kb
            
＞10 kb
        
        

            
基因组DNA
            
50 ng～250 ng
            
100 ng～300 ng
            
150 ng～40