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基因敲除小鼠

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更新时间: 2023-08-17T15:15:18

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基因敲除小鼠
       2013年1月份,美国两个实验室在《Science》杂志发表了基于Crispr-Cas9技术在细胞系中进行基因敲除的新方法,一种全新的人工核酸内切酶clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9出现,它主要是基于细菌的一种获得性免疫系统改造而成,其特点是制作简单,作用效果高。

技术原理:
       CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种广泛存在于细菌与古细菌中的,由RNA介导的可遗传的获得性免疫系统,这种免疫系统为宿主细胞提供了对外源DNA(如噬菌体质粒)的免疫功能。
       此系统的工作原理是CrRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA (trans-activating RNA)结合形成tracrRNA/crRNA复合物,次复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与CrRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。而通过人工设计这两种RNA,可以改造形成具有引导作用的SgRNA (short guide RNA),足以引导Cas9对DNA的定点切割。中乔新舟目前已经成功将此技术应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备,以及条件性敲除(Loxp系统)模型的制备。

CRISPR/Cas9技术特点:
       1、可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除;
       2、可对基因进行定点修饰(Tag、GFP、RFP、点突、条件性敲除);
       3、试验周期短、价格低、效率高;
       4、可应用于大、小鼠等。