细胞培养人最怕的事：污染突袭！
你是否经历过 —— 精心养了一周的细胞，突然出现不明颗粒、培养基变浑浊、生长速度骤降？这大概率是细胞污染找上门了！污染不仅让前期努力付诸东流，还可能影响实验数据准确性，成为科研路上的 “绊脚石”。今天就带大家全面解锁细胞污染防治秘籍，从源头规避风险，遇到污染也能冷静应对～
细胞污染主要分 4 类
1. 细菌污染（最常见）
变浑浊的培养基（图片来源于网络） 细菌污染（图片来源于网络）
Ø 形态特征：细菌的个体非常小，结构简单，无细胞核、细胞器，目前已知最小的细菌只有0.2 μm。细菌呈现三种基本形状：球形（球菌）、杆状（芽孢杆菌）或弯曲（弧菌、螺菌）。
Ø 污染特征：细菌污染时细胞培养基可能在4-6小时呈现浑浊，显微镜下可见大量细小的黑色颗粒，细胞形态逐渐皱缩、脱落，呈现病怏怏的状态。
Ø 解决方案：CSP006, 0513青霉素- 链霉素混合溶液
2. 真菌污染（隐蔽性强）
酵母菌污染（图片来源于网络） 霉菌污染（图片来源于网络）
Ø 形态特征：常见的真菌主要为酵母菌和霉菌两大类。酵母菌是单细胞结构，无菌丝，个体呈球形、卵圆形或椭圆形，直径通常在 3～5 μm，呈现出芽生殖的特征; 霉菌呈纤细的丝状、管状结构或絮状 、绒毛状的结构。
Ø 污染特征：初期培养基清澈，后期出现白色 / 黄色絮状沉淀，或镜下可见丝状菌丝、孢子，细胞生长缓慢直至停滞。
Ø 解决方案： CSP007青霉素- 链霉素- 两性霉素B 混合溶液, CSP066青霉素-链霉素-新霉素溶液, CSP246真菌/霉菌清除试剂
3. 支原体污染（“隐形杀手”）
形态各异的支原体（图片来源于网络） 被支原体“附身”的HT1080（图片来源于网络）
Ø 形态特征：支原体大小为0.15~0.3 μm，在光学显微镜下无法观察到支原体，需使用电子显微镜。支原体形态各异，有球状、环状、丝状、分枝状。
Ø 污染特征：支原体污染的培养基无明显变化，细胞逐渐出现形态异常（如变大、扁平）、增殖变慢，严重时核质比异常。
Ø 解决方案：CSP037支原体清除试剂，CSP201支原体高效预防试剂
4. 黑胶虫污染（“神秘杀手”）
黑胶虫污染视频1（来源于客户） 黑胶虫污染视频2（来源于客户）
Ø 形态特征：黑胶虫通常在镜下呈卵圆状或球杆状小黑点，并呈现布朗运动以及明显的增殖现象。
Ø 污染特征：培养基一般不浑浊，复苏或传代时易出现黑胶虫污染，并且与细胞呈现此消彼长的现象，严重时会造成细胞裂解和凋亡。
Ø 解决方案：CSP093黑胶虫清除试剂
预防为王：5 个关键环节守住防线
1. 环境消毒：打造无菌 “堡垒”
Ø 超净台/生物安全柜使用前用 75% 酒精擦拭，紫外照射 30 分钟；
Ø 实验室地面、桌面每周用含氯消毒剂/滴露彻底清洁，定期检测空气沉降菌；
Ø 操作时佩戴一次性手套、口罩，手套接触非无菌物品后立即更换。
2. 试剂耗材：从源头把控质量
Ø 选择正规渠道的培养基、血清、胰酶的相关试剂；
Ø 耗材（离心管、培养皿、移液管），开封后尽快使用，避免反复开盖暴露。
3. 操作规范：细节决定成败
Ø 所有操作在超净台/生物安全柜内进行，避免手臂跨越培养瓶 / 皿上方，移液时动作轻柔，减少气泡产生（气泡易携带细菌）；
Ø 不同细胞系分开操作，使用专用移液管、培养基，避免细胞交叉污染；
Ø 定期检查培养箱湿度、CO₂浓度，托盘内加入无菌水（可加少量抗生素抑制细菌滋生）。
4. 定期监测：早发现早处理
Ø 每天观察细胞形态、培养基颜色，怀疑污染时及时镜检；
Ø 定期进行支原体检测（PCR 法、荧光染色法），建议每 1-2 个月筛查一次，新购入细胞优先检测。
5. 应急处理：污染后别慌！
Ø 轻微污染：若细胞状态尚可，可加入适量抗生素（如青霉素 - 链霉素双抗、支原体清除剂），连续培养 2-3 代，期间密切观察，若污染未控制则果断丢弃；
Ø 严重污染：直接丢弃污染细胞及培养基，相关耗材高压灭菌处理，超净台/生物安全柜、培养箱用酒精 + 紫外彻底消毒，避免污染扩散。
�� 预防为主，防治结合
细胞污染防治的核心是 “预防为主，防治结合”，规范操作、严格消毒、定期监测三者缺一不可。若要抢救污染的细胞，可使用抗生素，但不要过度依赖抗生素，长期使用易导致耐药性，更不能抱有侥幸心理 —— 一次不规范操作，就可能让所有努力归零！
希望这篇指南能帮大家避开污染 “坑”，让细胞健康生长，实验顺利推进！